Matavimo fermentų kinetika
Kaip šiek tiek fono, fermentai yra baltymai, kurie veikia kaip katalizatoriai, sumažinantys aktyvacijos energijos kiekį reakcijai atsirasti. Aktyvinimo energija yra energija, reikalinga norint reakcijas "pradėti", nes daugybė reakcijų nėra labai greitai (ar visai atsiranda), jei jos yra termodinaminės įmanomos.
Fermentai katalizuoja konkrečias reakcijas tam tikroje vietoje (vadinama aktyvia vieta), kur reagentai jungiasi ir reaguoja gaminant produktus. Substratai turi aktyvias svetaines, kurios yra būdingos tik jiems, taigi, kad jokia kita medžiaga nebūtų susieta ar reaguotų toje pačioje vietoje. Kaip užraktas ir raktas, kiekvienas fermentas katalizuoja tik vieną konkrečią reakciją (su tam tikromis išimtimis).
Konkreti veikla yra naudojama baltymų izoliavimo metoduose, norint nurodyti gryninimo procentą. Pirkdami fermentus, svarbu žinoti šį prietaisą, kad būtų tiksliai nurodyta, kiek gryno fermento jūs gaunate.
Matuojant fermentų kinetiką (fermento su substratu ar paviršiumi reakcijos greitį), specifinė veikla apibrėžiama kaip fermento pavidalo substrato (katalizuojamų reakcijų) kiekis fermento preparate vienam mg baltymų per laiko vienetą.
Konkrečios veiklos pavyzdys būtų:
- Konkretus išskirto fermento aktyvumas buvo matuojamas 150 umoles / min / mg baltymo prieš valymą ir 800 umoles / min / mg po gryninimo.
Konkreti veikla yra svarbi fermento grynumo priemonė. Skirtingos grynojo fermento partijos turi tas pačias vertybes ir net fermentinį tirpalą praskiedus daug kartų turės vienodas specifines aktyvumo vertes, net jei bus skirtingos fermento aktyvumo vertės. Tai yra todėl, kad skaičiuojant konkrečią veiklą, vienodai veikiamas skaitiklis (vienetai / ml) ir vardiklis (mg / ml).
Konkreti veikla labai skiriasi nuo veiklos, tačiau konkrečios veiklos apskaičiavimas vis dar priklauso nuo veiklos vertės. Tai reiškia, kad nurodyta specifinė aktyvumo vertė taip pat priklausys nuo fermentų vieneto apibrėžties.
Fermentų partijos, kurių koncentracija yra mažesnė nei tikėtasi, gali turėti fermentų molekules, kurios yra pakeistos arba sumaišomos su priemaišomis.
Veiksniai, veikiantys fermentų aktyvumą
Gali būti, kad vienas fermentas gali būti skirtingas išmatuotas aktyvumo vertes, kai matuojamas skirtingose laboratorijose (ty realių matomų aktyvumų skirtumų, o ne akivaizdžių skirtumų, atsirandančių naudojant skirtingus vienetų apibrėžimus).
Bandymo būdas (bandymų metodas nustatant fermentų grynumą) turės įtakos praneštoms aktyvumo vertėms. Pavyzdžiui, fermentai paprastai yra aktyvesni tarp temperatūrų 37 laipsnių Celsijaus, palyginti su 20 laipsnių Celsijaus, taigi, jei bandymas atliekamas 21 laipsnių Celsijaus, vertės skirsis nuo bandymų, atliktų esant 32 laipsnių Celsijaus temperatūrai (paprastai , bandymai atliekami 20-37 laipsnių Celsijaus temperatūroje).
Taigi fermento vieneto apibrėžimas būtų geriau išreiškiamas 1 vienetu (U) yra fermento kiekis, kuris katalizuoja 1 nmol substrato reakciją per minutę standartinėmis sąlygomis.