Kaip užšaldyti bakterinę kultūrą (liofilizacija)

Liofilizacija arba šaldymas džiovinant yra trumpa laboratorinė procedūra

Džiovinimas šaldant, taip pat vadinamas liofilizavimu arba kriodizacija, yra vandens pašalinimas iš produkto po to, kai jis užšaldomas (po to dedama į vakuumą), leidžiantis ledui pereiti iš kietos į garus, neišsiliejus į skystą fazę. Ledas (arba kiti užšaldyti tirpikliai) pašalinami iš produkto per sublimacijos procesą, o susietosios vandens molekulės pašalinamos per desorbcijos procesą.

Liofilizacijos pagrindai

Vienas iš geriausių bakterijų, grybų, mielių ar kitų mikroorganizmų kultūros laikymo būdų ilgą laiką yra šaldymo proceso naudojimas. Ši trumpa laboratorinė procedūra gali būti atliekama su bet kokiu komerciškai prieinama šaldymo džiovintuvu, kuris išsaugos jūsų kultūros kolekciją. Kadangi liofilizacija yra sudėtingiausia ir brangiausia džiovinimo forma, paprastai procesas ribojamas labai švelniomis, karščiui jautriomis medžiagomis. Medžiagos, kurios nėra sugadintos įšaldant, paprastai gali būti liofilizuotos, kad nereikėtų laikyti šaldytuve.

Šis procesas gali užtrukti tris valandas ir 24 valandas, išskyrus kultūros augimo laiką.

Žingsnis po žingsnio liofilizacijos procesas

1. Pirma, auginkite LB ar kitą tinkamą maistinių agarų plokštelę per naktį esančią mikroorganizmo kultūrą ar veją.

2. Tada, prieš pradedant autoklave, paruošti sterilius buteliukus su užspaudžiamuoju dangteliu, su dangteliais (guminiai kamšteliai) lengvai atskirai viršuje. Įdėkite popieriaus etiketes, išspausdintus kultūros identifikavimu vamzdeliuose prieš autoklave. Arba naudokite vamzdelius su sterilumo kapsulėmis .

1. Į plokštelę įpilkite 4 ml liofilizavimo buferio. Jei reikia, ląsteles galima laikyti steriliu stikliniu lazdele.

2. Kultūros suspensiją greitai perneškite į sterilizuotus buteliukus. Į kiekvieną buteliuką įpilkite maždaug 1,5 ml. Sandariklis su guminiu dangteliu.

3. Užšaldykite kultivavimo suspensiją buteliukuose, padėdami buteliukus -20 laipsnių Celcius šaldytuve.

1. Kai kultūros užšaldomos, paruošdami šaldiklį, jį įjunkite ir laiku, kol stabilizuosis atitinkama temperatūra ir vakuumo sąlygos. Atlikite tai pagal gamintojo instrukcijas konkrečiam naudojamo šaldiklio markei.

2. Atsargiai ir aseptiškai buteliukus ant buteliukų uždėkite buteliuko dangtelį, kad drėgmė išnyktų peršalimo proceso metu ir buteliukus įdėkite į džiovinimo kamerą. Vakuumą įpilkite į kamerą pagal gamintojo instrukcijas.

3. Leiskite kultūros laiką visiškai liofilizuoti (išdžiūti). Tai gali užtrukti nuo kelių valandų iki nakties priklausomai nuo kiekvieno mėginio dydžio ir kiek jų yra.

4. Išimkite mėginius iš šaldiklio kameros pagal gamintojo instrukcijas ir nedelsdami užsandarinkite buteliukus guminėmis kamštelėmis, po to - apspaudimo viršūnėmis.

5. Laikykite liofilizuotą kultūros rinkinį kambario temperatūroje.

Jums tereikia produktų

• Šaldytuvas
• Maistinės ar kitos tinkamos agaro plokštelės (ir auginimo kultūra)
• Stiklo lazdele
• Liofilizavimo buferis
• Suvyniojami buteliukai su guminėmis kamšteliais (ir dangtelio dangteliu)
• Šaldiklis

<sub>Nuoroda:

SP Scientific. Pagrindiniai šaldymo džiovinimo principai. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>