Šie buferiai gali būti naudojami biologiniams tikslams beveik neutralaus pH
Trys pKa fosforo rūgšties vertės (iš CRC chemijos ir fizikos vadovo) yra 2,16, 7,21 ir 12,32. Mononatrio fosfatas ir jo konjugato bazė, dinatrio fosfatas paprastai naudojami buferiniams tirpalams, kurių pH vertė yra apie 7, biologiniams tikslams, kaip parodyta čia.
Padaryti šį buferį yra šiek tiek sunkiau, nei padaryti TAE ir TBE buferius. Tačiau tai nėra labai sunku. Tiesiog vidurkis. Šį buferį reikia pakelti apie 10 minučių. Štai kaip.
1. Nuspręskite buferio savybes
Prieš pradėdami gaminti buferį, pirmiausia turėtumėte žinoti, kokį molį jūs norite, kokį kiekį ir kokio norimo pH. Dauguma buferių geriausiai veikia esant 0,1 M ir 10 M koncentracijai. PH turi būti ne daugiau kaip 1 pH vieneto rūgšties / konjugato bazės pKa. Siekiant paprastumo, šis pavyzdys apskaičiuojamas 1 litrui buferio.
2. Nustatykite rūgšties santykį su baze
Naudokite Hendersono-Hasselbalcho lygtį (toliau), norėdami nustatyti, koks santykis tarp rūgšties ir bazės reikalingas, norint gauti norimo pH buferį. Naudokite pKa reikšmę, artimiausią jūsų pageidaujamam pH, ir santykis bus susijęs su rūgštinių ir bazinių konjugatų pora, atitinkančia tą pKa.
HH lygtis: pH = pKa + log ((bazė) / [rūgštis])
Buferiui, kurio pH yra 6,9, [bazė] / [rūgštis] = 0,4898
[Rūgščių] ir "[Base"] sprendimas [
Norimas buferio molaras yra [Acid] + [Base] sumos.
1 M buferiui [bazė] + [rūgštis] = 1 ir [bazė] = 1 - [rūgštis]
Pakeičiant šį santykio lygtį, nuo 2 žingsnio gausite:
[Rūgštis] = 0,6712 mol / L
Išspręskite [rūgštis]
Naudojant lygtį: [Base] = 1 - [Acid], galite apskaičiuoti, kad:
[Bazė] = 0,3288 mol / L
3. Sumaišykite rūgštį ir konjugato bazę
Po to, kai jūs naudojate Hendersono-Hasselbalcho lygtį, norėdami apskaičiuoti, kokį rūgšties santykį su baze reikia jūsų buferiui, paruoškite maždaug 1 litro tirpalo, naudodami teisingą kiekį mononatrio fosfato ir dinatrio fosfato.
4. Patikrinkite pH
Naudokite pH zondą, kad patvirtintumėte, ar pasiekiamas buferio pH. Prireikus šiek tiek pakoreguokite fosforo rūgštį arba natrio hidroksidą (NaOH).
5. Ištaisykite garsumą
Kai pasiekiamas pageidaujamas pH, buferio tūris talpinamas 1 litru. Tada praskieskite buferį, kaip norima. Tas pats buferinis tirpalas gali būti praskiedžiamas, kad būtų sukurta 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M buferių arba tarp jų.
6. Buferio patarimai
Atminkite, kad pKa nėra lengvai išmatuota iki tikslios vertės. Literatūros šaltiniai iš skirtingų šaltinių gali būti mažai skirtingos.
7. Ką reikia
Norint sukurti buferį, jums reikės trys medžiagos, o likusios medžiagos - įranga. Medžiagos yra mononatrio fosfatas, dinatrio fosfatas ir fosforo rūgštis arba natrio hidroksidas pH sureguliavimui.
Taip pat reikės pH matuoklio ir zondo bei tinkamo laboratorijų įrangos. Tai apima tūrio matavimo kolbą, graduuotus balionus, stiklinius kepsnius ir maišymo barus.
Galiausiai turėsite maišantį keptuvę.