Šis buferis naudojamas DNR judėjimo tyrimui
Šis buferis turi mažą jonų jėgą ir mažą buferinį pajėgumą. Tai geriausiai tinka didelių (> 20 kb) DNR dalių elektroforezei ir dažnai reikia keisti arba recirkuluoti ilgesnį (> 4 val.) Gelio veikimo laiką.
Atsižvelgdami į tai, galbūt norėsite apsvarstyti keletą buferio paketų.
Atsižvelgiant į tai, kad buferį lengva padaryti, o veiksmus galima atlikti greitai, tuo pačiu metu gaminant daugiau nei vieną partiją neturėtų būti ypač daug laiko ar sunku ištraukti. Naudodamiesi toliau pateiktomis instrukcijomis, TAE buferiui atlikti reikia 30 minučių. Štai kaip:
Paruoškite EDTA atsarginį tirpalą
EDTA (etilendiamino tetraacto rūgšties) tirpalas paruošiamas anksčiau laiko. EDTA visiškai neišeis į tirpalą, kol pH bus sureguliuotas iki maždaug 8,0. Į 500 mililitrų pradinį 0,5 M EDTA pradinį tirpalą pasveriama 93,05 g EDTA dinatrio druskos (FW = 372,2). Ištirpinama 400 mililitrų dejonizuotame vandenyje ir pH sureguliuojama natrio hidroksidu (NaOH). Supilkite tirpalą iki galutinio 500 mililitrų tūrio.
Sumažinti atsargų tirpalą TAE
Koncentruokite (50x) pradinį TAE pradinį tirpalą, sveriant 242 gramus Tris bazės (FW = 121.14) ir ištirpinkite jį maždaug 750 mililitrų dejonizuoto vandens.
Atsargiai įpilkite 57,1 mililitro ledinės rūgšties ir 100 mililitrų 0,5 M EDTA (pH 8,0). Po to reguliuokite tirpalą iki 1 litro galo. Šis pradinis tirpalas gali būti laikomas kambario temperatūroje. Šio buferio pH nėra koreguojamas ir turi būti apie 8,5.
Paruoškite TAE darbo tirpalą
Vieno TAE buferinio tirpalo tirpalas praskiedžiamas pagrindiniu tirpalu 50 x dejonizuotame vandenyje.
Galutinė tirpalo koncentracija yra 40 mM. Tris-acetatas ir 1 mM EDTA. Dabar buferis yra paruoštas naudoti agarozės gelyje.
Ką reikia buferiui
Kadangi atliekant TAE buferį reikalingas tik greitas ir paprastas instrukcijų rinkinys, tam reikalingų medžiagų kiekis nėra pernelyg didelis. Jums reikės tik EDTA dinatrio druskos, tris bazės ir ledinės acto rūgšties.
Prireikus, buferio nustatymui taip pat reikalingas pH matavimo ir kalibravimo standartas. Taip pat reikės 600 ml ir 1500 ml maišytuvų ar kolbų, taip pat graduuotus balionus. Pagaliau jums reikės dejonizuoto vandens, maišykite strypus ir sumaišykite plokštes.
Įpakavimas
Kur jūs planuojate sukurti buferį mokyklos vietoje, darbo vietoje ar kitoje vietoje, pvz., Namuose? Patikrinkite inventorių prieš pradėdami įsitikinti, kad turite visas pirmiau nurodytas medžiagas TAE buferiui.
Jei jums nereikės mokėti už medžiagą, rekomenduojama pasirinkti buferį ne jūsų namuose. Galite lengvai užsakyti reikalingas medžiagas internetu arba apsilankyti specializuotose parduotuvėse.