Šis buferis naudojamas DNR elektroforezės atskyrimui
TBE buferis yra ypač naudingas mažesnių DNR fragmentų (MW <1000) atskyrimui, pavyzdžiui, mažiems restrikcijos fermentų suskaidymo produktams.
TBE turi didesnį buferinį pajėgumą ir suteikia ryškesnę skiriamąją gebą nei TAE buferis . TAE buferis yra tirpalas, sudarytas iš Tris bazės, acto rūgšties ir EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE paprastai yra brangesnis už TAE ir slopina DNR ligazę, kuri gali sukelti problemų, jei bus numatyti vėlesni DNR valymo ir susimaišymo etapai. Su trimis paprastais žingsniais sužinosite, kaip padaryti TBE buferį. Šiam buferiui sukurti nereikėtų daugiau nei 30 minučių. Štai kaip:
Paruoškite EDTA atsarginį tirpalą
EDTA (etilendiamino tetraacto rūgšties) tirpalas turi būti paruošiamas anksčiau. EDTA visiškai netirps į tirpalą, kol pH bus sureguliuotas iki maždaug 8,0. Į 500 mililitrų pradinį 0,5 M EDTA pradinį tirpalą pasveriama 93,05 g EDTA dinatrio druskos (FW = 372,2). Tuomet ištirpinkite 400 mililitrų dejonizuotu vandeniu ir sureguliuokite pH su NaOH. Po to supilkite tirpalą iki galutinio 500 mililitrų tūrio.
Paruoškite TBE atsargų tirpalą
Pasverkite 54 g Tris bazės (FW = 121.14) ir 27,5 g boro rūgšties (FW = 61.83) ir tirpinkite tiek maždaug 900 mililitrų dejonizuoto vandens, koncentruoti (5x) TBE pradinio tirpalo. Tada įpilama 20 mililitrų 0,5 M EDTA (pH 8,0) ir tirpalas sureguliuojamas iki 1 litro galutinio tūrio.
Šis tirpalas gali būti laikomas kambario temperatūroje, tačiau nuosėdos susidaro senesniuose tirpaluose. Laikykite buferį stikliniuose buteliuose ir išmeskite nuosėdas.
Paruoškite darbo tirpalą TBE
Dėl agarozės gelio elektroforezės TBE buferis gali būti naudojamas koncentracijai 0,5x (1:10 koncentruoto nuosėdų praskiedimo). Pradinis tirpalas praskiedžiamas 10x dejonizuotame vandenyje. Galutinė tirpalo koncentracija yra 45 mM Tris borato ir 1 mM EDTA. Dabar buferis yra paruoštas naudoti agarozės gelyje .
Ko tau reikia
Norėdami sukurti TBE buferį, reikės tik keturių medžiagų. Likę šio sąrašo elementai yra įranga. Reikalingos keturios medžiagos yra EDTA dinatrio druska, Tris bazė, boro rūgštis ir dejonizuotas vanduo.
Kalbant apie įrangą, reikės atitinkamai pH-metro ir kalibravimo standartų. Be to, jums reikės 600-milliliterų ir 1500 mililitrų stiklinių ar kolbų. Jūsų įrangos poreikio apvalinimas yra graduuotas cilindras ir maišomas baras ir maišoma plokštės.
Patikrinkite laboratorijoje esantį inventorių, kurį naudosite, kad įsitikintumėte, jog turite viską, ko reikia, prieš pradėdami dirbti. Nieko nėra blogiau, nei sustoti sprendimo parengimo viduryje, nes jūs baigėte tinkamas medžiagas.
Jei jūsų laboratorija yra mokykloje ar jūsų darbo vietoje, pasitarkite su tinkamu darbuotojais, kad pamatytumėte, jog jie turi visus daiktus sandėlyje. Tai galite sutaupyti laiko ir energijos pabaigoje.