Kaip padaryti, kad šis imunohistocheminis atspalvio buferis
Fosfatinis buferinis druskos tirpalas (PBS) yra buferinis tirpalas, dažniausiai naudojamas imunohistocheminiu (IHC) dažymu, ir dažnai naudojamas biologiniuose tyrimuose. PBS yra vandenyje esantis druskos tirpalas, kurio sudėtyje yra natrio vandenilio fosfato, natrio chlorido ir kai kuriais atvejais kalio chlorido ir kalio divandenilio fosfato.
Imunohistocheminis dažymas
Immunohistocheminis metodas reiškia antigenų, tokių kaip baltymų, nustatymą audinio sekcijos ląstelėse, naudojant antibiotikų, specialiai susietų su antigenu biologiniuose audiniuose, principu.
Imunofluorescencinis dažymas buvo pirmasis imunohistocheminis dažymas.
Antigenai tampa matomi konjuguotu antikūnų, naudojant fluorescencijos dažiklius dėl antigeno ir antikūnų surišančiosios reakcijos. Šis procesas vyksta, kai jis aktyvuojamas su fluorescuojančio mikroskopo įdomiu šviesos specifiniu bangos ilgiu.
Sprendimų osmoliacija ir jonų koncentracija atitinka žmogaus kūną - jie yra izotoniški.
PBS receptas
PBS galite paruošti keliais būdais. Yra keletas formulių. Kai kuriose iš jų nėra kalio, o kituose yra kalcio arba magnio .
Šis receptas yra palyginti lengvas. Tai 10X PBS pradinio tirpalo (0,1 M). Tačiau jūs taip pat galite pagaminti 1X pradinį tirpalą arba pradėti šią 10X receptą ir atskiesti iki 1X.
Visas procesas trunka apie 10 minučių.
Taip pat pateikiama galimybė pridėti Tween.
Ką turėsite padaryti PBS buferį
- Natrio fosfatas vienbazis (bevandenis)
- Dvandenis natrio fosfatas (bevandenis)
- Natrio chloridas
- Skalės ir svėrimo laivai
- Magnetinė maišyklė ir maišymo juosta
- PH pH zondas, kuris yra kalibruojamas ir tinkamas pH sureguliavimo sprendimas
- 1L tūrio matavimo kolba
- Tween 20 (neprivaloma)
Kaip padaryti fosfatinio buferinio druskos (PBS)
10,9 g bevandenio natrio fosfato (Na2HPO4), 3,2 g bevandenio natrio vienos fosfato (NaH2PO4) ir 90 g natrio chlorido (NaCl).
Ištirpinkite šiek tiek mažiau nei 1 litro distiliuoto vandens.
Nustatykite pH iki 7,4 ir pripildykite tirpalą iki galutinio 1 litro tūrio.
Prieš naudodamiesi 10x, praskieskite ir, jei reikia, sureguliuokite pH.
Galite paruošti PBS tirpalą, kuriame yra 0,5 proc. Tween 20, įpilant 5 ml Tween 20 į 1 L tirpalą.
Patarimai, kaip padaryti PBS buferį
Po to, kai pagaminate PBS tirpalą, laikykite buferį kambario temperatūroje.
Bevandeniai reagentai gali būti pakeisti, bet turėsite perskaičiuoti atitinkamą kiekvienos masės kiekį, kad tilptų pridėtos vandens molekulės.
Fosfatinės buferinės druskos (PBS) naudojimas
Su fosfatiniu buferiu ištirtas druskos tirpalas yra daug naudingesnis, nes jis yra izotoniškas ir netoksiškas daugumai ląstelių. Jis gali būti naudojamas praskiesti medžiagas ir dažnai naudojamas skalauti ląstelių konteinerius. PBS gali būti naudojamas kaip įvairūs būdai, siekiant išdžiovinti biomolekules, nes jame esantys vandens molekuliai bus susisteminti, pvz., Aplink medžiagos baltymą. Jis bus "išdžiovintas" ir imobilizuotas iki kieto paviršiaus.
PH išlieka pastovi ir nuosekli, kad būtų išvengta ląstelių sunaikinimo.
Plonas vandens sluoksnis, jungiantis su medžiaga, apsaugo nuo denatūravimo ar kitų konformacinių pokyčių. Karbonatų buferiai gali būti naudojami tam pačiam tikslui, bet mažiau veiksmingai.
PBS taip pat gali būti naudojamas pamatiniam spektrui matuojant baltymų adsorbciją elipsometrijoje.