Taip pat vadinama RFLP analize, ši technika naudoja atskirų žmonių genetinių kodų polimorfizmą . Nors visi gyvūno nariai turi iš esmės tą patį genetinį makiažą, šie nedideli skirtumai susideda iš skirtingų fenotipų, tokių kaip išvaizda ar metabolizmas, tarp individų.
RFLP: analizės metodika ir programos
RFLP analizės metodas apima tam tikro DNR srities pjūvio pjovimą su žinomu kintamumu, restrikcijos fermentais, tada atskiria DNR fragmentus agarozės gelio elektroforezėje ir nustato fragmentų skaičių ir santykinius dydžius.
Restruktūrizuojantis fermentas yra fermentas, baltymo molekulė, kuri pernauna DNR restrikcijos vietose. Iš esmės DNR mėginys yra suskaidomas ir suskaidomas restrikcijos fermentais. Gautos fragmentai yra atskirti pagal jų ilgį, o kiekvieno išbandyto dydžio fragmentų dydis skirsis.
Visas RFLP procesas reikalauja zondo ženklinimo, DNR fragmentacijos, elektroforezės, blotingų, hibridizacijos, plovimo ir autoradiografijos. Aptikta RFLP vizualizuojama naudojant rentgeno plėvelę autoradiografijoje, kur DNR fragmentus galima apžiūrėti ir analizuoti, kai jie yra atskirti vienas nuo kito elektroforeze.
Kai kurios paraiškos RFLP analizei apima:
- DNR pirštų atspaudai . Teismo ekspertai gali naudoti RFLP analizę, kad įtariamieji būtų identifikuoti pagal įrodymų pavyzdžius, surinktus nusikaltimo scenose.
- Tėvystė. RFLP taip pat naudojamas tėvystės nustatymui ar kilmės nustatymui.
- Genetinė įvairovė. Ši technika gali būti naudojama tiriant laukinės gamtos evoliuciją ir migraciją, tyrinant gyvūnų populiacijų veisimosi tendencijas ir nustatant bei diagnozuojant tam tikras ligas.
Technologija, kaip naudoti RFLP aptikti variacijos genomus, yra gyvybiškai svarbi genomo žemėlapių ir genetinių ligų analizės priemonė. Jei konkrečioje ligos geno vietoje ieškoma tam tikros chromosomos, tuomet mokslininkai analizuos šeimos narius su liga, o tada ieškos panašių paveldėjimo modelių RFLP aleliuose.
Kai lokalizuotas ligos genas, atliekant RFLP analizę kitiems šeimos nariams gali atsirasti mutantinių genų nešėjas arba signalizuoti apie bendrą ligos riziką. Svarbu atkreipti dėmesį į tai, kad RFLP technika nėra plačiai naudojama dabar, kai naujos, tvirtesnės technologijos yra naudojamos DNR analizei teismo medicinoje ir keliose kitose srityse.
Neigiamas analizės aspektas
Deja, RFLP analizės metodas yra varginantis ir lėtas. Be to, reikalaujant didelės DNR mėginio, mėginys paprastai turi būti apie ketvirčio dydį, kuris yra palyginti didelis DNR pavyzdžiams - procesas, nuo zondo ženklinimo iki plovimo ir autoradiografijos, gali užtrukti iki visą mėnesį.
Žmogaus genomo projekto rezultatai labai pakeitė RFLP poreikį. Projektas leido nustatyti visą žmogaus ląstelėse esančio DNR seką, žmogaus genomą ir identifikuoti visus žmogaus genomo genus.